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在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)的過程中,需要使用組織細胞消化與解離試劑使組織細胞得以解離和分散,以便進行單個細胞懸液的制備或貼壁生長傳代細胞培養(yǎng)。常用的消化液有胰蛋白酶(Trypsin)-EDTA、膠原酶和分散酶等。NEST?提供多種效能不同的細胞消化液,以滿足您在原代細胞分離和貼壁細胞傳代培養(yǎng)中的不同需求。
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胰蛋白酶(Trypsin)是一種絲氨酸水解酶,它能夠把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羥基側切段,水解細胞間的蛋白質,破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關,在pH8.0和37°C時,胰酶的作用能力最強。因此,在使用胰酶時,應當把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細胞或對胰酶敏感的細胞常采用低濃度(0.05%)的胰酶進行細胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細胞連接促進細胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。對于EDTA可能會干擾后續(xù)的測試分析時,推薦選擇不含EDTA的消化液。具體請參考以下表格選擇合適的胰蛋白酶產品。
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