你只知道ELISA？
在生命科學領域多種情況下，及時、高效、經濟地測定和量化樣品中存在的抗原或抗體是至關重要的環(huán)節(jié)。
酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已被證明是非常寶貴的研究和診斷工具， 通過將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶（主要是HRP）標記的抗原抗體反應在固相表面，從而測量生物樣品中的抗體或抗原。
ELISA原理示意圖
傳統(tǒng)ELISA避免了同位素的使用，消除了安全性的隱患，但外部條件對溶液顏色變化的影響巨大且OD值有效的線性范圍過低，ELISA檢測的靈敏度和動態(tài)范圍大大受制于光吸收技術的缺陷。
1982年Halonen等人在J Clin Microbiol雜志上發(fā)表了題為” Time-resolved fluoroimmunoassay: a new test for rubella antibodies” 的文章，標志著免疫檢測正式跨入熒光時代，這也是DELFIA技術的原型。
簡單來說，DELFIA相比傳統(tǒng)ELISA實驗有兩個區(qū)別：
1. 檢測抗體上的酶HRP換成鑭系螯合物（(Eu, Sm, Tb, Dy）標記。
2. 檢測方式為熒光檢測。
DELFIA原理示意圖
DELFIA中用到的鑭系元素是一類特殊的具有熒光性質的元素，這對實驗材料——酶標板提出了要求。
絕大多數ELISA都選擇透明酶標板作為作為載體和容器，但發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的，光不僅會從垂直方向發(fā)散，還從水平方向發(fā)散出來，很容易的就會通過透明酶標板各個孔之間的間隙和孔壁。相鄰孔之間相互影響，造成結果失誤。
白色的酶標板可用于較弱的光檢測，常用于一般的化學發(fā)光和底物顯色（如雙熒光素酶報告基因分析）。
黑色的酶標板因其自身會有光吸收，其信號要弱于白色的酶標板，一般用于檢測較強的光，如熒光檢測。
? 高結合力
耐思黑色酶標板由非自熒光材料制成，表面經處理后，其蛋白結合能力大大增強，可達500ng IgG/cm2，主要結合的蛋白分子量>10kD。
? 背景熒光低，可消除非特異反應帶來的問題。
黑色的酶標板因其自身會有光吸收，可排除一些較弱的背景干擾熒光。
? 可拆式設計
白色酶標板框搭配黑色酶標板條的可拆式設計更便于操作。
當需要將板條拆下時，可從板條正面兩端輕輕向上掰動，然后摳取下來，如上圖所示。
若板條太緊難以掰動，可用手指抵住板條底部輕輕向上頂，然后如上圖將板條摳取下來。
務必要戴好無塵手套，以免污染板條而影響板條的透光性。
不可從板條的一端強行掰取，容易造成板條斷裂。
在裝板條時，要注意方向，板條兩端分別設計成方形和半圓形，半圓形那端必須裝在有凸起臺階的卡槽內（箭頭所在處），切勿裝反。
將板條裝入板框后，在兩側和中間部位都需要進行按壓，壓實后方可進行后續(xù)實驗。
ELISA·DELFIA
